Die Lage im Dreiländereck von Deutschland, Frankreich und der Schweiz gibt dem Dreiländermuseum auch seine inhaltliche Ausrichtung. Es widmet sich der Geschichte und Kultur von drei Ländern und einer Region – als europaweit einziges Museum dieser Art.
Für über 2 Millionen Einwohner der trinationalen RegioTriRhena präsentiert das Museum die „ExpoTriRhena“ als zentrale grenzüberschreitende Dauerausstellung. Aktionen und museums-pädagogische Angebote führen dort Deutsche, Franzosen und Schweizer aller Generationen zusammen.
Mit rund 50.000 Objekten betreut das Museum im Depot eine der größten Sammlungen Südbadens. Sie ist Basis für regelmäßige große Sonderausstellungen. Ihr Ausbau und ihre Pflege sichert wichtiges Kulturgut für künftige Generationen. Interessierte profitieren von einer umfangreichen digitalen Sammlungs-Datenbank.
Die historisch-kulturgeschichtliche Sammlung ist durch ihr grenzüberschreitendes Profil ohne Vergleich. Die kunsthistorischen Sammlung dokumentieret mit mehreren tausend Werken südbadische Kunstgeschichte. Die Sammlung zu J.P. Hebel macht das Museum außerdem zur wichtigsten literarischen Gedenkstätte des Dichters.
In einem Netzwerk arbeitet das Museum mit vielen Partnern in Deutschland, Frankreich und der Schweiz zusammen. Dadurch steht das Museum häufig im Mittelpunkt spannender Projekte mit intensiver Beteiligung der Bevölkerung und einem umfangreichen Veranstaltungsprogramm.
